高致病性PRRSV GD强弱毒感染猪外周血淋巴细胞亚群的变化及双重荧光定量RT-PCR鉴别方法的建立
The Changes of the Lymphocyte Subpopulations in Peripheral Blood of the Pigs Inoculated with Highly Pathogenic PRRSV GD Wild and Vaccine Type and the Duplex Real-time RT-PCR Differential Detection
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的各个年龄的猪的繁殖与呼吸障碍疾病.PRRS对养猪业危害很大,经济损失可观,世界动物卫生组织将其列为必须报告的疫病,我国将其列为二类动物疫病.在我国,HP-PRRSV弱毒疫苗的研制与运用为高致病性猪繁殖与呼吸综合征的防控发挥了重要的作用.但是对PRRSV弱毒疫苗的免疫机理的研究鲜有报道.本研究运用血常规技术和流式细胞技术分析了PRRSV感染SPF猪后,猪体内外周血淋巴细胞亚群变化,从细胞水平探讨PRRSV GD强弱毒感染对外周血淋巴细胞亚群的影响.从免疫学的方面探讨PRRSV弱毒疫苗对猪体的影响,从而为疫苗的研制提供参考.PRRSV疫苗研制出来后与强毒株的鉴别问题势在必行.根据Genbank中登录的39株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)全基因序列和PRRSV疫苗株(GDr180株)全基因序列的比对结果,在PRRSV Nsp2和Orf7基因的保守区找到可区分鉴别PRRSV GDr180株与其他PRRSV毒株的特异性位点,通过设计MGB探针,建立了双重实时荧光定量RT-PCR方法.通过对PRRSVGDr180株和GD强毒株病毒液、感染猪血清和组织样品检测证明了该方法的可行性;用双重实时荧光定量RT-PCR方法检测PRRSV GDr180株病毒液时,其敏感性达到19.4copies/μL,在检测GD强毒株时敏感性达到34.2copies/μL,证明了该方法具有良好的敏感性;通过对PRRSV其他8个毒株的检测结果证明:该方法能将PRRSV GDr180与其他毒株进行鉴别,与猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒Ⅱ型和猪细小病毒不发生交叉反应,试验证明该方法具有良好的特异性;由于该方法特异性好、敏感性强和快速省时的特点,因而可用于PRRSV GDr180疫苗株与强毒株的鉴别检测.
- 作者：
- 张文利
- 学位授予单位：
- 中国兽医药品监察所
- 专业名称：
- 预防兽医学
- 授予学位：
- 硕士
- 学位年度：
- 2012年
- 导师姓名：
- 宁宜宝
- 中图分类号：
- S858.28
- 关键词：
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗GDr180；高致病性猪繁殖与呼吸综合征强毒株；外周血淋巴细胞亚群；双重荧光RT-PCR；鉴别检测
- highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome live vaccine GDr180；wild-type highly pathogenic North American PRRSV；The changes of the Lymphocyte subpopulationsin Peripheral blood；duplex real-time RT-PCR；differential detection